電泳時膠回收和凝膠成像的注意事項
電泳時膠回收和凝膠成像的注意事項 | 時間: December-11 14:32:29 | 分類:技術(shù)欄目
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1. 電泳的buffer和gel都是新制的，切膠的臺子清理干凈，刀片較好洗凈滅菌，總之一句話就是保證切下的帶沒有外源dna污染。
2. 切膠是要把整個目的片斷所在位置的膠全部回收。為了減少膠的體積，可以用相對比較薄的膠來做，只要夠點樣即可，也可采用薄而寬的梳子來跑膠。
3. 關(guān)于防護，在一般有機玻璃后就足夠了，戴上防護面具以保護眼睛，如果戴樹脂眼鏡就可以了。要是非常害怕紫外照射，或者對于膠有特殊要求，例如要求不含EB，可以采用點marker和帶刻度的尺子一起照相的方法來確定目的條帶在膠上的位置進行切膠。
4. 按照正常程序點marker跑膠，然后切下有marker的膠，EB染色，紫外燈下與帶刻度的尺子一起照相。由于要回收的帶與marker間的相對位置已知，根據(jù)尺子來衡量未染色膠上目的帶的位置即可。如果覺得很難判斷，可以直接在marker邊點少量的樣，這樣位置就容易確定了。
凝膠成像分析系統(tǒng)的使用和注意事項：
凝膠成像分析系統(tǒng)：可以應(yīng)用在蛋白電泳凝膠，DNA凝膠，樣品進行圖象采集并進行定性和定量分析，樣品包括：EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、 Radiant Red等染色的核酸監(jiān)測；以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各種染色的蛋白質(zhì)凝膠如考染等。（或UV,EB和有色及可見樣品成像）
使用注意事項：
• 注意開機順序，先開凝膠成像系統(tǒng)，再打開電腦進入軟件。
• 紫外凝膠照相時要防止EB 污染儀器，凝膠成像系統(tǒng)的門不能用污染的手套接觸，進行軟件操作時同樣不能被污染的手套接觸。
• 在使用紫外光源照相的過程中，不可以打開凝膠成像系統(tǒng)前面板。
• 照相后經(jīng)廢膠取出，并用較軟的紙擦拭干凈。
• 調(diào)焦時要輕，動作不要劇烈。
• 環(huán)境電壓 不穩(wěn)定 時，請使用穩(wěn)壓電源。使用過程中如遇斷電，請及時將儀器電源關(guān)閉，直至重新來電。
• 使用時，請先打開儀器的電源開關(guān)，再打開電腦開關(guān)并打開軟件（ Quantity One ）。
• 保持觀測室內(nèi)環(huán)境干燥，及時將遺留在觀測板上的水或其他液體檫干（可使用軟質(zhì)紙，一般卷紙即可）。
• 觀測用 EB （溴乙錠）染色的凝膠時，注意不要污染儀器表面。千萬不要用手直接接觸凝膠，或戴著接觸過凝膠的手套去接觸儀器的門和觀測臺的把手。
• 使用儀器時，要將門及觀測臺關(guān)緊，否則將無法正常使用紫外燈。
• 盡可能不要將電腦連接到因特網(wǎng)或局域網(wǎng)上，同時在電腦上安裝殺毒軟件（推薦使用正版軟件），做到專機專用。
• 較長時間不用儀器時，請將儀器用防塵罩蓋上。
• 為延長燈管的使用壽命，請觀測好凝膠后及時關(guān)閉光源（儀器自身有 15 分鐘的自動保護程序）。
