生物實(shí)驗(yàn)中常用電泳方法
生物實(shí)驗(yàn)中常用電泳方法 | 時(shí)間: June-5 17:30:45 | 分類(lèi):技術(shù)欄目
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指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是較早使用的區(qū)帶電泳。
將濾紙條水平地架設(shè)在兩個(gè)裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點(diǎn)于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤(rùn)濕后，再蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓（100V～1000V）進(jìn)行電泳。
二、醋酸纖維素薄膜電泳
電泳時(shí)經(jīng)過(guò)膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點(diǎn)是分離速度快、電泳時(shí)間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。
三、凝膠電泳
由區(qū)帶電泳中派生出的一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式。
凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳是普通電泳中應(yīng)用較多的兩種形式。
目前，這種辦法被廣泛用來(lái)分析蛋白質(zhì)和核酸。
四、等電聚焦電泳
1．等電聚焦電泳過(guò)程
一種利用有pH值梯度的介質(zhì)，分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。
在一個(gè)穩(wěn)定連續(xù)的線性pH梯度的溶液（兩性載體電解質(zhì)）中進(jìn)行分離，每一種被分離的兩性物質(zhì)都移向與它的等電點(diǎn)相一致的pH位置，在那里不再移動(dòng)（稱(chēng)為聚焦）。
2．等電聚焦電泳的特點(diǎn)
①使用兩性載體電解質(zhì)，在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的pH梯度；
②由于“聚焦效應(yīng)”，即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面；
③電泳速度快;④分辨率高;
⑤加入樣品的位置可任意選擇；
⑥可用于測(cè)定蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)的等電點(diǎn);
⑦適用于中、大分子量（如蛋白質(zhì)、肽類(lèi)、同工酶等）生物組分的分離分析。
五、等速電泳
采用兩種不同濃度的電解質(zhì)，一種為前導(dǎo)電解質(zhì)，充滿整個(gè)毛細(xì)管柱；另一種為尾隨電解質(zhì)，置于一端的電泳槽中。前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分，尾隨電解質(zhì)則低于任何樣品組分，被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間，在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下，各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中移動(dòng)，實(shí)現(xiàn)分離。
六、雙向凝膠電泳（二維電泳）
第一向采用等電聚焦 根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中各個(gè)蛋白質(zhì)的PI的不同，將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。
第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳 （SDS-PAGE）就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進(jìn)行分離。其結(jié)果不再是條帶狀，而是呈現(xiàn)為斑點(diǎn)狀。
七、免疫電泳
免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴(kuò)散兩種方法的結(jié)合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進(jìn)行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開(kāi)；然后加入抗體做雙相免疫擴(kuò)散，把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴(kuò)散而相遇，在二者比例適當(dāng)?shù)牡胤?，形成肉眼可?jiàn)的沉淀弧。
