跑電泳常見條帶問題分析
跑電泳常見條帶問題分析 | 時(shí)間: June-5 17:45:45 | 分類:技術(shù)欄目
凌儀生物提供高速離心機(jī)，美國Bio-rad伯樂電泳，德國eppendorf艾本德移液器，美國ABI基因擴(kuò)增儀PCR，雅培原位雜交儀，Thermo熱電離心機(jī)等實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備，以及Corning康寧，Axygen愛思進(jìn)，Greiner格瑞拉等耗材要省錢，別錯(cuò)過哦。一、微笑形區(qū)帶（兩邊翹起，中間凹下）：
形成原因：主要是由凝膠中間部分凝固不均勻引起的，多出現(xiàn)于較厚的凝膠中。
處理辦法：待其充分凝固再做實(shí)驗(yàn)。
二、皺眉形區(qū)帶（兩邊向下，中間鼓起）：
形成原因：主要出現(xiàn)在蛋白質(zhì)垂直電泳槽中，一般是由兩板之間的底部間隙氣泡未排除干凈引起的。
處理辦法：可在兩板之間加入適量緩沖液，以排除氣泡。
三、區(qū)帶拖尾：
形成原因：主要是由樣品溶解效果不佳或分離膠濃度過大引起的。
處理辦法：加樣前離心；選擇適當(dāng)?shù)臉悠肪彌_液，加適量樣品促溶劑；電泳緩沖液放置時(shí)間過長(zhǎng)，重新配制；降低凝膠濃度。
四、區(qū)帶出現(xiàn)紋理：
形成原因：主要是由樣品不溶性顆粒引起的。
處理辦法：加樣前離心，加適量樣品促溶劑。
五、鬼帶：
形成原因：主要是由于還原劑在加熱的過程中被氧化而失去活性，致使原來被解離的蛋白質(zhì)分子重新折疊結(jié)合和亞基重新締合，聚合成大分子，其分子量比目標(biāo)區(qū)帶大，有時(shí)不能進(jìn)入分離膠。但它與目標(biāo)區(qū)帶有相同的免疫學(xué)活性，在免疫印跡反應(yīng)中可見，能與目標(biāo)區(qū)帶對(duì)應(yīng)的抗體作用。
處理辦法：加熱煮沸后再添加適量的DTT或Beta巰基乙醇，以補(bǔ)充不足的還原劑；加適量EDTA來阻止還原劑的氧化。
六、溴酚藍(lán)不能起到指示作用：
形成原因：實(shí)驗(yàn)中常遇到溴酚藍(lán)已跑出板底，但蛋白質(zhì)卻還未跑下來的現(xiàn)象，主要與緩沖液和分離膠的濃度有關(guān)。
處理辦法：更換正確pH值的Buffer，降低分離膠濃度。
七、區(qū)帶很粗：
形成原因：主要是由于濃縮膠未濃縮好。
處理辦法：適當(dāng)增加濃縮膠長(zhǎng)度，保證濃縮膠貯液的pH正確（6.8），適當(dāng)降低電壓。
八、電泳電壓很高而電流很低：
形成原因：主要是由于電泳槽沒有正確裝配，電流未形成通路。
處理辦法：電泳槽正確裝配。
